- Oggetto:
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Laboratorio di Biologia Cellulare e Patologia
- Oggetto:
Anno accademico 2011/2012
- Codice dell'attività didattica
- MFN0414
- Docenti
- Prof. Paola Costelli
Prof. Gabriella Bonelli
Prof. Michele De Bortoli - Corso di studi
- Scienze Biologiche D.M. 270
- Anno
- 3° anno
- Periodo didattico
- II semestre
- Tipologia
- Affine o integrativo
- Crediti/Valenza
- 8
- SSD dell'attività didattica
- BIO/06 - anatomia comparata e citologia
MED/04 - patologia generale - Oggetto:
Sommario insegnamento
- Oggetto:
Programma
MODULO DI BIOLOGIA CELLULARE
Colture di cellule, tessuti e organi. Colture primarie e linee cellulari. Caratteristiche delle cellule in coltura.
Sicurezza nel laboratorio di colture cellulari. La cappa per colture cellulari. Lavoro in sterilità. Conteggio delle cellule con l’emocitometro.
L’incubatore per colture cellulari. I recipienti per colture cellulari.
Composizione dei terreni di coltura. Le contaminazioni. Modalità di sterilizzazione.
L’organizzazione del laboratorio di colture cellulari. Applicazioni avanzate della coltura di cellule: ingegneria tissutale
Presentazione delle attività di laboratorio e linee guida per progetti da consegnare
Esercizi teorici di preparazione di soluzioni, mezzi di coltura e diluizioni di cellule.
Presentazione della strumentazione del laboratorio colture e delle manipolazioni da eseguire. Consegna della linea cellulare
Passaggio della linea cellulare, conta e allestimento delle piastre per valutare la crescità cellulare
Passaggio della linea. Conta cellulare. Congelamento
Passaggio della linea. Conta cellulare. Acquisizione di immagini. Scongelamento della linea cellulare
Passaggio della linea. Conta cellulare. Valutazione della sopravvivenza cellulare.
Acquisizione d’immagini e filmati per documentare in particolare adesione e ciclo cellulare
Progetto di allestimento di un laboratorio di colture cellulare
Analisi dati e relazione dell’attività di laboratorio
MODULO DI PATOLOGIA
I esperimento: effetto del TNF sulla via di segnalazione insulina/IGF-1 dipendente e sulla proteolisi Ca2+-dipendente in miotubi C2C12
Presentazione dell’argomento, studio letteratura, progettazione
Piastramento mioblasti C2C12, induzione differenziamento a miotubi
Immunofluorescenza per verificare avvenuto differenziamento
Trattamento con TNF, raccolta campioni su cui procedere a determinazioni successive
Dosaggio proteine
Western blotting (analisi dello stato di attivazione della via di segnalazione insulina/IGF1-dipendente
Dosaggio fluorimetrico per valutare l’attività del sistema proteolitico Ca2+-dipendente
II esperimento: Effetto del co-trattamento con TNF e insulina su miotubi C2C12 (progettazione, differenziamento mioblasti, trattamento, raccolta campioni per determinazioni successive; cf. I exp.)
Dosaggio proteine, western blotting e dosaggio fluorimetrico (cf. I exp.)
Analisi e interpretazione dei risultati (I e II esperimento)
Presentazione e discussione dei risultati in relazione allo scopo dell’esperimento
UNIT OF CELL BIOLOGY
Cell and tissue culture. Primary cultures and cell lines. Organization of a cell culture laboratory. Biosafety. Contaminations, sterilization and aseptic technique. Passaging of cells in culture. Evaluation of the number of cells in a culture. Cell growth curve assay. Cell line preservation (freezing and thawing); evaluation of cell viability.
Result analysis, presentation and discussion
UNIT OF PATHOLOGY
I experiment: Effect of TNF on the insulin/IGF-1 dependent suignal transduction pathway as well as on Ca2+-dependent proteolysis in C2C12 myotubes
Study of the literature, experimental project. Practical execution: C2C12 myoblast differentiation, check by immunofluorescence analysis, treatment with TNF. Determination of protein concentration. Western blotting analysis to evaluate the state of activation of the insulin/IGF-1 pathway. Fluorometric assay to measure calpain activity.
II experiment: Effect of co-treatment with TNF and insulin in C2C12 myotubes.Both protocol and determinations described for experiment I will be repeated in experiment II.
Result analysis, presentation and discussion.
Al termine del corso gli allievi dovranno avere acquisito le conoscenze teoriche e pratiche alla base dalle comuni tecniche di colture cellulari, le caratteristiche tecniche della strumentazione utilizzata, le misure di sicurezza associate alle manipolazioni. Inoltre, dovranno conoscere l’uso delle colture cellulari come modello sperimentale. Infine dovranno aver acquisito la capacità di consultare banche dati online, di documentare e discutere i propri risultati, di saper lavorare in gruppo e di saper organizzare il proprio tempo.
Il materiale didattico presentato a lezione è disponibile presso l’aula informatica, DBAU, V. Accademia Albertina 13
I testi base consigliati per il corso sono:
Reed R et al. Metodologie di Base per le Scienze Biomolecolari, Zanichelli, 2002
Animal cell culture, I. Freshney
Consegna di relazioni di laboratorio e valutazione individuale delle conoscenze tecniche, risoluzioni di problemi di diluizioni cellulare e valutazione della capacità di lavorare in sterilità sotto cappa.
La frequenza alle lezioni non è obbligatoria; per i corsi di laboratorio e le attività di esercitazione relative ai corsi la frequenza è obbligatoria e non può essere inferiore al 70% delle ore previste.Testi consigliati e bibliografia
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Note
INFORMAZIONI IMPORTANTI:
Il voto finale delle prove in itinere potrà essere registrato il giovedì 19 maggio alle ore 13:30 presso DBAU oppure il 23 giugno in corrispondenza della data dell'appello.
Studenti con risultati insufficienti oppure che non intendono accettare il voto finale delle prove in itinere dovranno sostenere nuovamente l'esame (nelle date degli appelli ufficiali) che consisterà nelle prove individuali di biologia cellulare (test scritto e prova pratica) e nel test scritto di patologia.
I voti delle prove di gruppo di biologia cellulare (quaderno e report) rimangono validi.
Essendo l'esame unico, non è possibile sostenere separatamente le prove di biologia cellulare o di patologia."Curriculum Biomolecolare Cellulare, Curriculum Tecnico Analitico.
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Moduli didattici
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