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Laboratorio di Biologia Cellulare e Patologia

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Anno accademico 2012/2013

Codice dell'attività didattica
MFN0414
Docenti
Dott. Fabio Penna
Prof. Isabelle Perroteau
Corso di studi
Scienze Biologiche D.M. 270
Anno
3° anno
Periodo didattico
II semestre
Tipologia
Affine o integrativo
Crediti/Valenza
8
SSD dell'attività didattica
BIO/06 - anatomia comparata e citologia
MED/04 - patologia generale
Oggetto:

Sommario insegnamento

Oggetto:

Programma

MODULO DI BIOLOGIA CELLULARE
Colture di cellule, tessuti e organi. Colture primarie e linee cellulari. Caratteristiche delle cellule in coltura.
Sicurezza nel laboratorio di colture cellulari. La cappa per colture cellulari. Lavoro in sterilità. Conteggio delle cellule con l’emocitometro.
L’incubatore per colture cellulari. I recipienti per colture cellulari.
Composizione dei terreni  di coltura. Le contaminazioni. Modalità di sterilizzazione.
L’organizzazione del laboratorio di colture cellulari. Applicazioni avanzate della coltura di cellule: ingegneria tissutale
Presentazione delle attività di laboratorio e linee guida per progetti da consegnare
Esercizi teorici di preparazione di soluzioni, mezzi di coltura e diluizioni di cellule.
Presentazione della strumentazione del laboratorio colture e  delle manipolazioni da eseguire. Consegna della linea cellulare
Passaggio della linea cellulare, conta e allestimento delle piastre per valutare la crescità cellulare
Passaggio della linea. Conta cellulare. Congelamento
Passaggio della linea. Conta cellulare. Acquisizione di immagini. Scongelamento della linea cellulare
Passaggio della linea. Conta cellulare. Valutazione della sopravvivenza cellulare.
Acquisizione d’immagini  e  filmati  per documentare in particolare adesione e ciclo cellulare
Progetto di allestimento di un laboratorio di colture cellulare
Analisi dati e relazione dell’attività di laboratorio

MODULO DI PATOLOGIA

Le citochine pro-infiammatorie, processi anabolici e catabolici, cachessia neoplastica
Morte cellulare: apoptosi e necrosi
Metodi per l’analisi della morte cellulare: Microscopia, Citofluorimetria, Analisi biochimiche

Ricerca bibliografica e pianificazione esperienze di laboratorio: effetto della citochina TNFα in adipociti 3T3-L1 a differenti stadi di differenziamento
Presentazione articoli da parte degli studenti
Esperimenti:
Piastramento cellule 3T3-L1, induzione differenziamento ad adipociti
Colorazione Oil Red O per monitorare il differenziamento
Trattamento con TNFα, raccolta campioni su cui procedere a determinazioni successive
Valutazione degli effetti del TNFα sul differenziamento adipocitario e sulla lipolisi:
- colorazione Oil Red O e conteggio adipociti maturi
- estrazione lipidi e quantificazione spettrofotometrica
Valutazione della morte cellulare indotta dal TNFα:
- analisi morfologica, marcatura nuclei e mitocondri
- Lisi cellulare, dosaggio proteine, western blotting per caspasi3 (precursore e forma attiva)
Analisi ed interpretazione dei risultati



UNIT OF CELL BIOLOGY
Cell and tissue culture. Primary cultures and cell lines. Organization of a cell culture laboratory. Biosafety. Contaminations, sterilization and aseptic technique. Passaging of cells in culture. Evaluation of the number of cells in a culture. Cell growth curve assay. Cell line preservation (freezing and thawing); evaluation of cell viability.
Result analysis, presentation and discussion   

UNIT OF PATHOLOGY

Pro-inflammatory cytokines, anabolic and catabolic processes, cachexia

Cell death: apoptosis and necrosis

Methods for the analysis of cell death: - Microscopy
- Flow Cytometry
- Biochemical assays
Bibliographic research and planning of laboratory experiments: effects of TNF in 3T3-L1 adipocytes at different stages of differentiation
Article presentation by students
experiments:
Plating cells 3T3-L1, induction of differentiation to adipocytes
Oil Red O staining to monitor the differentiation
Treatment with TNFα, sample collection for further determinations
Assessment of TNF effects on adipocyte differentiation and lipolysis:
- Oil Red O staining and mature adipocyte count
- Lipid extraction and spectrophotometric quantification
Assessment of TNF induced cell death:
- Morphological analysis, staining with Hoechst 33342 and mitotracker
- Cell lysis, protein assay, western blotting for caspase 3 (precursor and active form)
Analysis and interpretation of results



Al termine del corso gli allievi dovranno avere acquisito le conoscenze teoriche e pratiche alla base dalle comuni tecniche di colture cellulari, le caratteristiche tecniche della strumentazione utilizzata, le misure di sicurezza associate alle manipolazioni. Inoltre, dovranno conoscere l’uso delle colture cellulari come modello sperimentale. Infine dovranno aver acquisito la capacità di consultare banche dati online, di documentare e discutere i propri risultati, di saper lavorare in gruppo e di saper organizzare il proprio tempo.



Il materiale didattico presentato a lezione è disponibile presso l’aula informatica, DBAU, V. Accademia Albertina 13
I testi base consigliati per il corso sono:
Reed R et al. Metodologie di Base per le Scienze Biomolecolari, Zanichelli, 2002
Animal cell culture, I. Freshney


Consegna di relazioni di laboratorio e valutazione individuale delle conoscenze tecniche, risoluzioni di problemi di diluizioni cellulare e valutazione della capacità di lavorare in sterilità sotto cappa.



La frequenza alle lezioni non è obbligatoria; per i corsi di laboratorio e le attività di esercitazione relative ai corsi la frequenza è obbligatoria e non può essere inferiore al 70% delle ore previste.

Testi consigliati e bibliografia



Oggetto:

Note

Curriculum Biomolecolare Cellulare, Curriculum Tecnico Analitico.

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Ultimo aggiornamento: 25/06/2013 16:31
Location: https://biologia.campusnet.unito.it/robots.html
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