Corso di laurea in Scienze Biologiche (L-13)

Metodologie Biochimiche

Anno accademico 2006/2007

Sommario insegnamento

• Obiettivi formativi
• Programma
• Testi consigliati e bibliografia
• Strumenti didattici

Obiettivi formativi

Obiettivi
L’allievo dovrà essere in grado di orientarsi correttamente sulla scelta delle procedure da utilizzare ed essere consapevole dei limiti delle stesse.

Programma

Introduzione: la cellula come unità funzionale e composti biologici da analizzare e caratterizzare. Condizioni da rispettare in vitro

Tecniche di estrazione di macromolecole: tessuti animale e vegetali (tecniche di omogeneizzazione), organismi monocellulari (colture microbiche). Metodi di recupero di proteine esocellulari, endocellulari e di membrana. Tecniche di lisi di pareti e membrane. Proteine espresse in sistemi diversi da quello naturale

Metodi di dosaggio proteico e di valutazione dell’attività enzimatica. Utilizzo di tecniche spettrofotometriche.

Solubilità delle proteine e tecniche di precipitazione. Filtrazione, dialisi, concentrazione del campione. Congelamento e liofilizzazione

Tecniche cromatografiche: cromatografia su strato sottile. Cromatografie su colonna: scambio ionico, interazioni idrofobiche, gel filtrazione, affinità, cromatofocusing. HPLC, FPLC, gas-cromatografie.

Tecniche elettroforetiche, SDS-PAGE, isoelettrofocalizzazione, elettroforesi bidimensionale, tecniche di densitometria, elettroeluizione, blotting ed elettroblotting. Colorazioni specifiche e aspecifiche per elettroforesi di proteine e glicoproteine. Immunoblotting, sistemi di marcatura mediante avidina-biotina, perossidasi da rafano e fosfatasi alcalina

Composizione in aminoacidi di una proteina. Struttura primaria: degradazione di Edman. Sequenze N- terminali e sequenze interne. Scelta delle proteasi

Tecniche di spettrometria di massa (PMF con Maldi, ESI-Ion trap)

Determinazione della struttura secondaria e terziaria e valutazione di metalli catalitici e strutturali e di centri redox: dicroismo circolare, NMR, EPR, spettroscopia di assorbimento atomico, titolazione spettroelettrochimica

A.J. Ninfa, D.P. Ballou. Metodologie di base per la biochimica e la biotecnologia. Zanichelli (2000).
IC Wilson, J. Wallcer. Metodologia biochimica: le tecniche biochimiche in laboratorio. Ed. Raffaello Cortina (1995).
R.L. Dryer, G.F. Lata. Metodologia biochimica Ed. Delfino (1993).

E’ fortemente consigliato l’utilizzo del seguente materiale per approfondimenti e integrazioni:
Materiale didattico e integrativo fornito a lezione (appunti e CD-rom contenente il materiale didattico utilizzato per le lezioni e le esercitazioni).

Infine sono di seguito indicati siti internet di interesse:
http://www.expasy.ch/
http://www.biology.arizona.edu/biochemistry/biochemistry.html

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