- Oggetto:
- Oggetto:
Metodologie Biochimiche
- Oggetto:
Anno accademico 2009/2010
- Codice dell'attività didattica
- B8574
- Docente
- Prof. Francesca Valetti
- Corso di studi
- Scienze Biologiche
- Anno
- 3° anno
- Periodo didattico
- Primo periodo didattico
- Tipologia
- Caratterizzante
- Crediti/Valenza
- 3 CFU
- SSD dell'attività didattica
- BIO/10 - biochimica
- Oggetto:
Sommario insegnamento
- Oggetto:
Obiettivi formativi
Finalità
Il corso si propone di fornire agli studenti: conoscenza teorico-pratica delle più importanti metodologie di estrazione, purificazione, caratterizzazione strutturale e catalitica delle proteine, nonché delle più recenti tecniche applicative.Obiettivi
Lallievo dovrà essere in grado di orientarsi correttamente sulla scelta delle procedure da utilizzare ed essere consapevole dei limiti delle stesse.- Oggetto:
Programma
Introduzione: la cellula come unità funzionale e composti biologici da analizzare e caratterizzare. Condizioni da rispettare in vitro
Tecniche di estrazione di macromolecole: tessuti animale e vegetali (tecniche di omogeneizzazione), organismi monocellulari (colture microbiche). Metodi di recupero di proteine esocellulari, endocellulari e di membrana. Tecniche di lisi di pareti e membrane. Proteine espresse in sistemi diversi da quello naturale
Metodi di dosaggio proteico e di valutazione dell’attività enzimatica. Utilizzo di tecniche spettrofotometriche.
Solubilità delle proteine e tecniche di precipitazione. Filtrazione, dialisi, concentrazione del campione. Congelamento e liofilizzazione
Tecniche cromatografiche: cromatografia su strato sottile. Cromatografie su colonna: scambio ionico, interazioni idrofobiche, gel filtrazione, affinità, cromatofocusing. HPLC, FPLC, gas-cromatografie.
Tecniche elettroforetiche, SDS-PAGE, isoelettrofocalizzazione, elettroforesi bidimensionale, tecniche di densitometria, elettroeluizione, blotting ed elettroblotting. Colorazioni specifiche e aspecifiche per elettroforesi di proteine e glicoproteine. Immunoblotting, sistemi di marcatura mediante avidina-biotina, perossidasi da rafano e fosfatasi alcalina
Composizione in aminoacidi di una proteina. Struttura primaria: degradazione di Edman. Sequenze N- terminali e sequenze interne. Scelta delle proteasi
Tecniche di spettrometria di massa (PMF con Maldi, ESI-Ion trap)
Determinazione della struttura secondaria e terziaria e valutazione di metalli catalitici e strutturali e di centri redox: dicroismo circolare, NMR, EPR, spettroscopia di assorbimento atomico, titolazione spettroelettrochimica
Testi consigliati e bibliografia
- Oggetto:
- Materiale didattico
Il materiale didattico presentato a lezione è disponibile su CD distribuito a inizio anno agli studenti (eventualmente su richiesta al docente in ulteriori copie)A.J. Ninfa, D.P. Ballou. Metodologie di base per la biochimica e la biotecnologia. Zanichelli (2000).
IC Wilson, J. Wallcer. Metodologia biochimica: le tecniche biochimiche in laboratorio. Ed. Raffaello Cortina (1995).
R.L. Dryer, G.F. Lata. Metodologia biochimica Ed. Delfino (1993).E fortemente consigliato lutilizzo del seguente materiale per approfondimenti e integrazioni:
Materiale didattico e integrativo fornito a lezione (appunti e CD-rom contenente il materiale didattico utilizzato per le lezioni e le esercitazioni).Infine sono di seguito indicati siti internet di interesse:
http://www.expasy.ch/
http://www.biology.arizona.edu/biochemistry/biochemistry.html - Oggetto: