- Oggetto:
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Metodi e applicazioni del DNA ricombinante
- Oggetto:
RECOMBINANT DNA TECHNOLOGY
- Oggetto:
Anno accademico 2019/2020
- Codice dell'attività didattica
- SVB0029A
- Docente
- Dott. Francesca Anselmi
- Insegnamento integrato
- LABORATORIO BIOMOLECOLARE (SVB0029)
- Corso di studi
- Scienze Biologiche D.M. 270
- Anno
- 3° anno
- Tipologia
- Affine o integrativo
- Crediti/Valenza
- 3
- SSD dell'attività didattica
- BIO/11 - biologia molecolare
- Modalità di erogazione
- Tradizionale
- Lingua di insegnamento
- Italiano
- Modalità di frequenza
- Lezioni facoltative e esercitazioni obbligatorie
- Tipologia d'esame
- Scritto
- Oggetto:
Sommario insegnamento
- Oggetto:
Obiettivi formativi
Lo studente conosce le principali metodiche del DNA ricombinante e le applicazioni per l'analisi di struttura ed espressione dei geni e per la manipolazione dei geni negli organismi.
Acquisisce anche pratica diretta nel clonaggio del DNA in E. coli, purificazione ed analisi di plasmidi.The student acquires knowledge about the main Recombinant DNA technologies and their application for the analysis of gene's function and for the manipulation of genes in different organisms. He also acquires direct practice in DNA cloning in E. coli, purification and analysis of plasmids.
- Oggetto:
Risultati dell'apprendimento attesi
Conoscenza delle principali metodologie del DNA ricombinante e delle loro applicazioni.
Conoscenza dei vari tipi di plasmidi, delle strategie di clonazione e dei metodi di trasformazione, trasfezione e trasduzione dei plasmidi ricombinanti.
Conoscenza di metodi per la generazione di proteine di fusione e loro applicazioni sia in vitro che in vivo.
Conoscenza dei metodi per l'analisi della funzione di geni e proteine e per lo studio delle interazioni proteina-proteina e proteina-acidi nucleici.
Conoscenza delle principali tecniche per la manipolazione dei geni sia in vitro che in vivo.
Knowledge of the main recombinant DNA technlogies and their applications.
Description of different types of plasmids, cloning strategies and transformation, transfection and transduction of recombinant vectors.
Knowledge of the main methods for the generation of fusion proteins and their applications in vitro and in vivo
Knowledge of the main methods for the analysis of gene's and protein's functions and for the study of protein-protein and protein-nucleic acid interactions.
Knowledge of the main strategies for genes manipulation in vitro and in vivo
- Oggetto:
Modalità di insegnamento
Lezioni fronatli: 12 ore; Esercitazioni di laboratorio: 12 ore.
La frequenza alle lezioni è facoltativa, mentre al laboratorio è obbligatoria.
Lectures: 12 hours; Practicals: 12 hours
Lectures attendance is optional, while it is mandatory at the practicals.
- Oggetto:
Modalità di verifica dell'apprendimento
Viene eseguito un test con 10 domande a risposta multipla sugli argomenti trattati durante le lezioni frontali, eseguito di norma a computer sulla piattaforma Moodle (50% del voto sul modulo di DNA Ricombinante).
Al termine dell'esperienza di laboratorio lo studente deve redigere una relazione sull'attività svolta, commentando i vari passaggi e i risultati ottenuti. La relazione può essere scritta anche in gruppo. Il voto ottenuto rappresenta il 50% del voto sul modulo di DNA Ricombinante.
Il voto finale del modulo è espresso in 30esimi e viene mediato con i risultati degli altri due moduli.
E' possibile integrare le due parti con un esame orale.
A test is carried out on the Moodle platform:
- the test consist of 10 closed questions on the arguments covered during the lectures.
- the grade obtained in the test represents 50% of the final grade on the Recombinant DNA module.
At the end of the practical session students, alone or in small groups, have to write a report about the laboratory experience:
- the student(s) should describe the protocol followed during the lab experience, with comments about the several steps and the obtained results
- the grade obtained in the report represents the remaining 50% of the final grade on the Recombinant DNA module.
It is possible to integrate the two parts with an oral exam.
The final grade of the module is expressed in 30ths and is mediated with the results of the other two modules.
- Oggetto:
Programma
Questo modulo del corso Laboratorio Biomolecolare rappresenta una premessa sulle metodologie classiche di applicazione del DNA ricombinante, mettendo in evidenza le applicazioni pratiche delle diverse metodiche e i modelli sperimentali:
- Enzimi di restrizione
- Tipi di plasmidi e specifiche applicazioni
- Strategie per la clonazione e la produzione di plasmidi ricombinanti
- Trasformazione, trasfezione, trasduzione
- Produzione di proteine ricombinanti
- Analisi delle interazioni proteina-proteina e proteina-DNA/RNA in vitro e in vivo
- Generazione di genoteche per NGS
- Modelli transgenici e editing genetico: geni reporter, knock-out, knock-out condizionali, sistema CRISPR-Cas9
Il modulo comprende un laboratorio pratico durante il quale gli studenti clonano il cDNA del fattore di trascrizione SOX2 nel vettore di espressione eucariotico pEF6 (digestione con enzimi di restrizione, ligazione, trasformazione batterica, estrazione e analisi dei plasmidi ricombinanti)
This module of biomolecular laboratory course represents a premise on the classic methods of recombinant DNA application, highlighting the practical applications of the different methods and experimental models:
- Restriction enzymes
- Types of plasmids and specific applications
- Cloning strategies
- Transformation, transfection and transduction
- Production of recombinant proteins
- Analysis of protein-protein and protein-DNA/RNA interactions in vitro and in vivo
- Generation of libraries for Next Generation Sequencing
- Transgenic models and gene editing: reporter genes, knock-out, conditional knock-out, CRISPR-Cas9 system
The module includes a practical laboratory during which the students perform the cloning of the cDNA of the transcription factor SOX2 in the eukaryotic expression vector pEF6 (RE digestion; ligation; transformation of competent bacteria; estraction and analysis of recombinant plasmids).
Testi consigliati e bibliografia
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Materiale online delle lezioni
Protocollo fornito durante le esercitazioni di laboratorio e relativa documentazione online
Slides used during the theoretical lectures
Material provided during the laboratory experience and related online documentation
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