- Oggetto:
- Oggetto:
Metodi e applicazioni del DNA ricombinante
- Oggetto:
RECOMBINANT DNA TECHNOLOGY
- Oggetto:
Anno accademico 2020/2021
- Codice dell'attività didattica
- SVB0029A
- Docente
- Mara Maldotti
- Insegnamento integrato
- LABORATORIO BIOMOLECOLARE (SVB0029)
- Corso di studi
- Scienze Biologiche D.M. 270
- Anno
- 3° anno
- Periodo didattico
- Da definire
- Tipologia
- Affine o integrativo
- Crediti/Valenza
- 3
- SSD dell'attività didattica
- BIO/11 - biologia molecolare
- Modalità di erogazione
- Tradizionale
- Lingua di insegnamento
- Italiano
- Modalità di frequenza
- Lezioni facoltative e esercitazioni obbligatorie
- Tipologia d'esame
- Scritto
- Oggetto:
Sommario insegnamento
- Oggetto:
Obiettivi formativi
Questo insegnamento concorre agli obiettivi formativi dell'area della biologia molecolare.
Lo studente conosce le principali metodiche del DNA ricombinante, le applicazioni per l'analisi di espressione dei geni, per lo studio di interazione proteina-DNA/RNA e per la manipolazione dei geni in organismi. Acquisisce anche pratica nella clonazione in E. coli con l'utilizzo di vettori ricombinanti, purificazione ed analisi del plasmide finale.
This course contributes to the education of the molecular biology area.
The student knows the main methods of recombinant DNA, applications for gene expression analysis, for the study of protein-DNA/RNA interaction and for gene manipulation. He also acquires direct practice in DNA cloning in E. coli, purification and analysis of the final construct.
- Oggetto:
Risultati dell'apprendimento attesi
- Conoscenza delle principali metodologie del DNA ricombinante e delle applicazioni.
- Conoscenza dei vari tipi di plasmidi, delle strategie di clonazione e dei metodi di trasformazione, trasfezione e trasduzione dei plasmidi ricombinanti.
- Conoscenza di metodi per la produzione di proteine di fusione e loro applicazioni sia in vitro che in vivo.
- Conoscenza dei metodi per l'analisi della funzione di geni e per lo studio delle interazioni proteina-proteina e proteina-DNA/RNA
- Conoscenza delle principali tecniche per la manipolazione dei geni.
- Knowledge of the main recombinant DNA technlogies and applications.
- Description of different types of plasmids, cloning strategies and transformation, transfection and transduction of recombinant vectors.
- Knowledge of the main methods for the generation of fusion proteins and their applications in vitro and in vivo.
- Knowledge of the main methods for the analysis of gene function and for the study of protein-protein and protein-DNA/RNA interactions.
- Knowledge of the main strategies for genome editing.
- Oggetto:
Modalità di insegnamento
A causa dell'emergenza COVID-19, le lezioni teoriche si svolgeranno su webex. Verranno registrate e messe a disposizione sulla piattaforma Moodle il giorno della lezione.
Le esercitazioni sono obbligatorie e in presenza in laboratorio. Saranno organizzate a piccoli gruppi, secondo le disposizioni di Ateneo. E' prevista una modalità telematica in caso di impossibilità.
Due to the COVID-19 emergency, theoretical lessons will take place on webex. They will be recorded and available on the Moodle platform on the day of the lesson.
The exercises are mandatory and they take place in the laboratory. They will be organized in small groups, according to the University protocol. In case of impossibility, some replacement teaching material will be provided.
- Oggetto:
Modalità di verifica dell'apprendimento
L'esame consiste in un test con 10 domande a risposta multipla, eseguito di norma a computer sulla piattaforma Moodle. Il voto ottenuto nel test rappresenta il 50% del voto sul modulo di DNA Ricombinante.
Inoltre, gli studenti, dovranno redigere una relazione sull'attività di laboratorio in piccoli gruppi, commentando i vari passaggi e i risultati ottenuti. Il voto ottenuto nella relazione di laboratorio rappresenta il 50% del voto sul modulo di DNA Ricombinante.
E' possibile integrare le due parti con un esame orale.
Il voto finale del modulo è espresso in 30esimi e viene mediato con i risultati degli altri due moduli.
A test is carried out on the Moodle platform with 10 multiple choise questions, the grade obtained in the test represents 50% of the final grade on the Recombinant DNA module.
Each group of students has to write a report about the laboratory experience: description of the protocol followed during the lab experience, with comments about the several steps and the obtained results. The grade obtained in the report represents the remaining 50% of the final grade on the Recombinant DNA module.
It is possible to integrate the two parts with an oral exam.
The final grade of the module is expressed in 30ths and is mediated with the results of the other two modules.
- Oggetto:
Programma
Questo modulo del corso Laboratorio Biomolecolare rappresenta una premessa alle metodologie classiche di applicazione del DNA ricombinante e mette in evidenza le applicazioni pratiche delle diverse metodiche e dei modelli sperimentali:
- Vettori plasmidici e specifiche applicazioni;
- Ruolo e utilizzo degli enzimi di restrizione e modificazione;
- Strategie per la clonazione e la produzione di plasmidi ricombinanti;
- Trasformazione, trasfezione, trasduzione;
- Produzione di proteine ricombinanti di fusione e purificazione;
- Analisi delle interazioni in vitro e in vivo: proteina-proteina (saggi in vitro, IP, Co-IP), proteina-DNA (EMSA, ChIP e analisi con qPCR), proteina-RNA (EMSA, RIP, PAR-CLIP, RNA pull down, ChIRP e analisi con RT-qPCR);
- Modelli transgenici, tecnologie di gene targeting, manipolazione genetica condizionale;
- Editing genomico: da ZNF e TALEN al sistema CRISPR/Cas9.
- Il modulo comprende un laboratorio pratico durante il quale gli studenti eseguiranno la clonazione in E. coli di un gene da cDNA in un vettore di espressione eucariotico (digestione con enzimi di restrizione, ligazione, trasformazione batterica, estrazione e analisi dei plasmidi ricombinanti).
This module of biomolecular laboratory course represents a premise to the classic methods of recombinant DNA applications and highlighting the practical applications of the different methods and experimental models:
- Plasmid vectors and specific applications;
- Role and use of restriction and modification enzymes;
- Strategies for the cloning and production of recombinant plasmids;
- Transformation, transfection, transduction;
- Production of recombinant fusion and purification proteins; In vitro and in vivo interaction analysis: protein-protein (in vitro, IP, Co-IP assays), protein-DNA (EMSA, ChIP and analysis with qPCR), protein-RNA (EMSA, RIP, PAR-CLIP, RNA pull down , ChIRP and analysis with RT-qPCR);
- Transgenic models, gene targeting technologies, conditional genetic manipulation; Genome editing: from ZNF and TALEN to the CRISPR / Cas9 system.
- The module includes a practical laboratory in which students will perform the cloning in E. coli of a gene from cDNA into a eukaryotic expression vector (digestion with restriction enzymes, ligation, bacterial transformation, extraction and analysis of recombinant plasmids).
Testi consigliati e bibliografia
- Oggetto:
Materiale online delle lezioni è disponibile sulla piattaforma Moodle:
http://biologia.i-learn.unito.it/Protocollo delle esercitazioni di laboratorio e relativa documentazione sono disponibili sulla piattaforma Moodle.
Testo consigliato: Lewin's GENES XII (Lewins Genes) (English Edition).
The teaching material is available on the platform Moodle: http://biologia.i-learn.unito.it/
Material of the laboratory experience and related documentation on the platform Moodle.
Recommended text: Lewin's GENES XII (Lewins Genes) (English Edition).
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